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當前位置:首頁 > 產(chǎn)品中心 > 細胞生物學 > 細胞凋亡 > AC12L072/AC12L073JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒

JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒

簡要描述:JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒操作簡單快速,可以通過流式細胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標儀檢測??梢詸z測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時,JC-1 聚集在線粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,產(chǎn)生紅色熒光;在線粒體膜電位較低時,JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,此時 JC-1 為單體,可以產(chǎn)生綠色熒光。

  • 產(chǎn)品型號:AC12L072/AC12L073
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-08-07
  • 訪  問  量:1326

詳細介紹

品牌其他品牌貨號AC12L072/AC12L073
規(guī)格20T供貨周期現(xiàn)貨
應用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

產(chǎn)品描述
  線粒體膜電位降低是細胞早期凋亡的一個標志,它發(fā)生在細胞膜上的磷酯酰絲*酸外翻與caspase水解酶激活之前。當線粒體膜通透性發(fā)生改變時,膜電位會降低。這種膜電位的改變是由于 Bax二聚體的形成和 Bid, Bak, Bad的激活,從而誘導線粒體膜形成孔隙造成的。當這些促凋亡蛋白被激活時,線粒體同時也將細胞se su C 釋放到細胞質(zhì)中。
  JC-1 是一種廣泛用于檢測線粒體膜電位△ Ψm的理想熒光探針,它可以檢測細胞、組織或純化的線粒體膜電位。在線粒體膜電位較高時,JC-1 聚集在線粒體的基質(zhì)中,形成聚合物,產(chǎn)生紅色熒光;在線粒體膜電位較低時,JC-1不能聚集在線粒體的基質(zhì)中,此時 JC-1 為單體,可以產(chǎn)生綠色熒光。通過 JC-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變可以很容易地檢測到膜電位的下降,同時也可以用 JC-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉(zhuǎn)變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標。
  JC-1單體的大激發(fā)波長為 510 nm,大發(fā)射波長為527 nm;JC-1 聚合物的大激發(fā)波長為 585 nm,大發(fā)射波長為 590 nm。操作簡單快速,可以通過流式細胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標儀檢測。
訂購信息

產(chǎn)品名稱貨號規(guī)格
JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒AC12L07220T
JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒AC12L073100T

產(chǎn)品組分

組分20T100T
A: JC-1,100× in DMSO100 μL500 μL
B : 10× Assay Bu?er2 mL10 mL
C: CCCP, 50 mM10 μL50 μL


保存方法
  組分A、B需4℃避光冷藏,并盡量避免反復凍融,組分C﹣20℃保存。有效期見外包裝。
光譜特性

Ex/Em:
510/527 nm(單體物,綠色);
585/590 nm(聚合物,紅色)。
操作步驟

1.試劑準備
配制 JC-1 工作液
按如下方案配置1mL 1×JC-1染色工作液:取10 µL 100×JC-1染色液,加入到890 µL滅菌的diH2O中,渦旋混勻,向上述混合液中加入100 µL 10× Assay Buffer,渦旋混勻,即可得到1×JC-1染色液。
】:
1配置體積可同比例擴大或縮小。
2不建議直接用1×Assay Buffer稀釋100×JC-1染色液,可能會出現(xiàn)沉淀。
配制1× Assay Buffer
用 diH2O 按 10:1 稀釋檢測緩沖液如1 mL 10×assay buffer + 9 mL diH2O)。
2.流式細胞染色方案
細胞染色
開始實驗之前,請確保JC-1和CCCP溶液已恢復至室溫。
1按實驗所需,在培養(yǎng)板中接種細胞(懸浮細胞不要超過106個/mL)。
2陽性對照組:根據(jù)培養(yǎng)基的量加入相應體積50 mM的CCCP溶液(如終濃度為50 μM即1 mL培養(yǎng)基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。對于特定的細胞,CCCP的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料確定。
3對于貼壁細胞,染色前先進行消化處理,將其制成細胞懸液,0.5 mL裝于離心管中。
4室溫下400 x g,離心5 min。
5除去上清。
6用0.5 mL的 JC-1 工作液重懸細胞。
7置于37℃細胞培養(yǎng)箱,孵育 15 min。
8室溫下400 x g,離心 5 min,去除上清。
9用 2 mL 的 PBS 緩沖液、培養(yǎng)基或1× Assay Buffer重懸細胞,離心去除上清,重復一次。
10用 0.5 mL的 PBS 、培養(yǎng)基或1× Assay Buffer重懸細胞,用流式細胞儀檢測分析。
流式細胞儀定量分析
對于正常細胞,在PE或PI(FL2)通道可以檢測到線粒體內(nèi)的JC-1紅色聚集物;對于凋亡細胞,在FITC(FL1)通道可以檢測到JC-1綠色單體物。
3.熒光顯微鏡染色方案
懸浮細胞染色
1參照流式細胞儀染色方案,對細胞進行染色。
2用0.3 mL的 PBS或培養(yǎng)基重懸細胞。
貼壁細胞染色
1在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板上接種細胞。
2陽性對照組:根據(jù)培養(yǎng)基的量加入相應體積50 mM的CCCP溶液(如終濃度為50 μM即1 mL培養(yǎng)基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。對于特定的細胞,CCCP的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料確定。
3去除培養(yǎng)基,加入JC-1工作液使其覆蓋細胞表面。
4置于37℃細胞培養(yǎng)箱,孵育 15 min。  
5除去染液,用PBS 緩沖液、培養(yǎng)基或1× Assay Buffer清洗一次細胞。
6用熒光顯微鏡觀察分析。
熒光顯微鏡成像
采用可以同時檢測熒光素和羅丹明,或者熒光素與Texas Red 的雙通道濾波器熒光顯微鏡觀察細胞。對于正常細胞,擁有完整的線粒體膜電位,線粒體在590 nm處發(fā)出紅色熒光,細胞質(zhì)發(fā)出綠色熒光;對于凋亡或壞死的細胞,染料以單體形式存在,在530 nm處發(fā)出綠色熒光。
4.測定熒光相對比率染色方案
1按照實驗要求在96孔板中接種細胞。
2陽性對照組:根據(jù)培養(yǎng)基的量加入相應體積50 mM的CCCP溶液(如終濃度為50 μM即1 mL培養(yǎng)基加入1 μL 50 mM的CCCP溶液),37℃孵育20 min。對于特定的細胞,CCCP的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料確定。
3根據(jù)熒光顯微鏡細胞染色方案對細胞進行染色處理。
4用熒光酶標儀檢測熒光值(紅色熒光:Ex/Em=550/600 nm;綠色熒光 Ex/Em=485/535 nm)。
5計算紅綠熒光比值。
6與正常細胞相比,在凋亡或壞死細胞中,紅綠熒光比值會降低。
注意事項

  該產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域




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